5分钟,帮你提升你的细胞培养技巧!

2018-03-08 17:05:06 hlk 26

新的一年,让我们再次回顾一下“细胞培养”的疑问解答。

Q1

细胞培养条件:如何基于培养基中碳酸氢钠的浓度水平来确定最优的CO2浓度?


如果培养基配方中含有:
NaHCO3(g/L) 浓度<1.5时,所需CO2浓度为4%;
NaHCO3(g/L) 浓度处于1.5-2.2时,所需CO2浓度为5%;

NaHCO3(g/L) 浓度处于2.2-3.4时,所需CO2浓度为7%;

NaHCO3(g/L) >3.5时,所需CO2浓度为10%

 

*有个例外情况。Gibco™ DMEM一般遵照Dulbecco的原始配方,含有3.7g/L碳酸氢钠。用户在CO2含量为5-10%的CO2培养箱中使用此培养基已有数十年,通常可以维持生理pH值;这也与所培养的细胞类型有关。随着细胞不断生长,pH值开始不断下降(由于乳酸的代谢性积累)。

 

Q2

细胞培养产品的使用:加入血清后的培养基可以使用多久?

 

通常情况下,加入血清后的培养基可使用三个星期。尽管没有正式的研究支持数据,这是我们研究人员的经验。


Q3

细胞培养产品的使用:存放于冰箱中的FBS为何会出现沉淀?

 

Gibco™ FBS未经预老化处理。当储存于2至8°C的条件下,血清中可能存在的各类蛋白与脂蛋白(如冷凝集素,纤维蛋白原,玻连蛋白等)会发生聚集,并且形成肉眼可见的沉淀或混浊。这并不会影响血清的使用性能。我们推荐您将FBS储存于–20°C,同时避免反复冻融。

 

Q4

细胞培养出现污染:我该如何去除细胞培养基中的支原体污染?

 

绝大部分情况下支原体污染无法从培养物中去除,只能弃用。不过也许您的培养物具有独特性,您不希望丢弃而试图去除污染。环丙沙星和Plasmocin™据报导适合此种应用。如果对相关实验方案或应用感兴趣,请联系抗生素供应商或参考已发表的文献。请注意支原体很难从培养物中清除,而且容易扩散,所以请对受污染的培养物进行隔离处理,直至支原体被完全清除,另外您的实验室可能也需要彻底净化。

 

Q5

细胞培养状态:我的细胞生长十分缓慢,这可能是什么原因所导致的?



Q6

我对目前使用的培养基很满意,尽管我向其中添加了10%的FBS。我为何需要换用高级培养基(Advanced Media)?

 

高级培养基可减少血清用量50%至90%。对于大多数细胞系而言,减少50%的血清用量不会导致任何营养问题。进一步降低血清含量可能会逐渐出现营养问题。如需将血清含量减至50%以上,则血清用量应具体视所用细胞系而定。降低血清用量的好处包括节约成本——特别是在血清价格上涨时期——延长某批血清的使用时间和减少实验条件的批次间差异。

 

Q7 

哪些细胞可以培养于去外泌体的FBS中,我又该使用何种FBS浓度?

 

我们专门测试了Jurkat、MCF-7、HeLa、PC3、HEK293与A549细胞,所有这些种类的细胞都生长良好。HeLa细胞对于去外泌体FBS的存在最为敏感。您可能需要对去外泌体FBS的浓度进行调整,以匹配特定细胞系与培养系统的需要。

 

我们推荐您以10%做为去外泌体FBS应用的起始浓度,在需要时进行上调或下调。同时,去外泌体FBS通过了单次传代后48小时的培养测试和验证(我们也成功完成了对HeLa、MCF-7和HEK293等细胞系长达96小时的培养测试)。

 

Q8 


我如果我应用CD FortiCHO™培养基完成了临床前工作,而现在又希望换用Dynamis™产品,我是否需要重复所有的前期工作?


我们针对两类培养基开展的一些研究显示这两款产品具有类似的结果;当您的监管团队认为有必要从一款培养基换用另一款时,可将这一信息在机构中存档以支持您的工作。从技术转化至生产的过程中,如果您观察到效价没有改变,您所表达的蛋白的性状也有可能没有差异,可能仅需要做CMC更新或将补料程序进行微调。


当然如果能够帮助您简化转换过程,我们的监管团队也很乐于与您的团队进行探讨。


Q9 


当我将细胞移至新培养瓶中,为何他们不贴壁?

 

缩短胰酶消化的时间,或使用更少量的胰酶进行处理,也可换用Gibco™ TrypLE™ Select或Gibco™ TrypLE™ Express。使用2-5 mL细胞生长培养基稀释胰酶处理体系后,将细胞悬液移至15 mL离心管中。以100 x g离心5-10分钟。

 

弃去上清液并使用2-5 mL新鲜培养基重悬细胞沉淀。确定细胞数量并按照常规方案将细胞接种入培养瓶,细胞应会正常贴壁。 



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