代谢组学检测样品要求
I.Medical metabonomics(医学代谢组学)
A.样品采集原则
1.包括各种动物(人、大鼠、小鼠、猴子、鸡、牛、羊、猪等)的血清/血浆,尿液,组织,唾液,淋巴液,膝盖滑液,舌苔,卵泡液,脑脊液,瘤胃液,粪便,细胞等。
2.动物体液采样后要迅速预处理,如加入抗凝血剂、防腐剂,并立即冷冻处理(-80 ℃ )。
B.血清样品
1.样品量要求:
a.NMR:500µl/例 (不得低于200µl/例)
b.GC-MS or LC-MS:200ul/例
c.一定避免反复冻融。
2.收集步骤:
a.血液收集在离心管中静置30分钟进行凝固分层。然后3000rpm离心5分钟,取上清装载干净的离心管中,再离心5分钟,8000rpm,取上清分装到冻存管中,每管0.2 or 0.5ml,立即-80℃冻存,直到干冰寄送。
3.注意事项:
a.取血时如用酒精消毒,请擦干擦拭部位,待酒精完全挥发后再取样。
b.取血时如用麻醉剂,建议用异氟醚 ,防止在NMR血清谱图中出现干扰峰。
c.如要采用血浆,请务必使用肝素钠抗凝管。
C.尿液样品
1.样品量要求:
a.1ml/例,原则上可以多取一点。
2.收集步骤:
a.尿液直接分装到离心管中,每管1ml,添加一滴(约10µl)质量体积为1/100(w/v)的叠氮化钠,-80℃冻存寄送。
D.瘤胃液样品
1.样品量要求:
a.1ml/例,原则上可以多取一点。
2.收集步骤:
a.瘤胃液经 6000×g 离心15min,取上清,分装, -80℃冷冻保存,干冰寄送。为了让样品能保存更长的时间,取样之后可添加一滴(约10µl)质量体积为1/100(w/v)的叠氮化钠溶液。尿液直接分装到离心管中,每管1ml,添加一滴(约10µl)质量体积为1/100(w/v)的叠氮化钠,-80℃冻存寄送。
E.其他种类的样品在收集之前请联系公司销售工程师。
II.Plant metabolomics(植物代谢组学)
A.样品采集原则
1.包括水稻,大麦,小麦,海带,杨树,柳树,烟草,玉米,甘蔗,三角褐指藻等。
2.植物样本:采集后迅速冷冻(液氮),然后转入-80 ℃ 保存。
B.样品采集步骤
1.取样,称取100mg,液氮冰冻;
2.匀浆化,球磨机 2min 20Hz,保持在-60℃环境下(低温匀浆后,可以在-80℃保存至少3个月);
3.酶灭活:加入1.4mL 100%甲醇(-20℃预冷),涡旋10s。再加入 60μL核糖醇(0.2mg/ml,in dH2O),再涡旋10s混匀;
4.在thermomixer仪器上震荡样品10min, 950rpm, 70℃;
5. 离心10min,11000g;
6.转移上清到Schott GL14玻璃瓶中;
7.加入750μL CHCl3(-20℃预冷) +1400μL dH2O(4℃预冷),涡旋混匀;
8.离心15min 2200g;
9.转移150μL上清到1.5mL 反应管中;
10.在真空浓缩器中干燥提取物;
11.储存到-80℃(最好在储存管中充满氩气或其他惰性气体,在-80℃下可以保存至少3个月);干冰寄送。
C.如直接送冻存的植物样品,请保证样品大于200mg,避免反复冻融。
III.Microbial metabolomics(微生物代谢组学)
D.样品采集原则
1.微生物有大肠杆菌,乳酸菌,红曲菌等。
2.快速取样,酶迅速失活,保持细胞的完整性;最大限度的提取代谢物;无偏向性, 不排除具有特殊物理、化学性质的分子;不破坏或改变代谢物的物理或化学特性。
E.样品采集步骤
微生物样品淬灭以后冻成干粉,干冰低温寄送。样品量大于200mg。
IV.Pharmaco-metabonomics(药物代谢组学)
F.样品采集原则
包括各种类型的中药,毒素,重金属,营养物质处理的各种模型,包括大鼠,小鼠,猴子,牛,猪,鸡,线虫,鲟鱼,斑马鱼等,对药物代谢组学实验设计具有丰富的经验。
G.血清样品
1.样品量要求:
NMR:500µl/例 (不得低于200µl/例);
GC-MS or LC-MS:200ul/例;
一定避免反复冻融。
2.收集步骤:
血液收集在离心管中静置30分钟进行凝固。然后3000rpm离心5分钟,取上清装载干净的离心管中,再离心5分钟,8000rpm,取上清分装到冻存管中,每管0.2 or 0.5ml,立即-80度冻存,直到干冰寄送。
3.注意事项:
a.取血时如用酒精消毒,请擦干擦拭部位,待酒精完全挥发后再取样。
b.取血时如用麻醉剂,建议用异氟醚 ,防止在NMR血清谱图中出现干扰峰。
c.如要采用血浆,请务必使用肝素钠抗凝管。
H.尿液样品
1.样品量要求:
1ml/例,原则上可以多取一点。
2.收集步骤:
尿液直接分装到离心管中,每管1ml,添加一滴(约10µl)质量体积为1/100(w/v)的叠氮化钠,-80度冻存寄送。
3.其他种类的样品在收集之前请联系公司销售工程师。
V.Lipidomics(脂质组学)
I.血清样品
1.样品量要求:
500µl/例,一定避免反复冻融。
2.收集步骤:
血液收集在离心管中静置30分钟进行凝固。然后离心取上清装载干净的离心管中,再离心5分钟,8000rpm,取上清分装到冻存管中,每管0.5ml,-80度冻存寄送。
J.组织及细胞沉淀:100mg/sample。
K.其他种类的样品在收集之前请联系公司销售工程师。