模式动物制备

模式动物制备和销售

华联科模型动物研究院始终专注于模式动物的基因编辑与模型研发，拥高专业的项目设计团队以及经验丰富 、受过严格专业培训 的实验技术队伍，建立了稳定而高效的基因工程小鼠研发服务平台，致力于提供最高标准的基因修饰模型解决方案 。华联科模型动物研究院提供组织细胞特异性诱导表达的基因敲入 、全敲除及条件性基因敲除小鼠模型构建、小鼠精子胚胎冷冻保存复苏等技术服务。服务范围涵盖国内大多数生物医药企业 、院校、科研及医疗机构。

转基因小鼠制备

由客户提供转墓因质粒图谱、质粒DNA及真相关序列信息，研究院负责质粒鉴定、酶切线性化DNA制备、小鼠受精卵显微注射 、注射受精卵移植 、移植小鼠孕期观察饲养、新生小鼠出生记录及生命维持 、编号及鼠尾基因组DNA抽握、转基因阳性小鼠的PCR鉴定等。

技术指标：显微注射用受精卵采自C57BL/ 6J（♀）与CBA（♂）的Fl代；胚胎移植（受精卵输卵筐移植）受体采用ICR代假孕母鼠；受精卵供体、受体及新生仔鼠均维持在SPF级小鼠饲养环境；获得转基因质粒六个月内提供3只以上鼠龄4-6周的转基因阳性小鼠（杂合子Funder），雌雄不限。 

全基因敲除小鼠模型制备

根据客户的需求进行打靶载体构建，由客户提供目标基因的Ensembl序列号，并提出拟剔除区域；研究院科研人员设计打靶策略，并反馈客户，经客户确认后进行打靶载体的构建及后续研发。研究院承诺提供3只以上阳性小鼠。

技术指标：显微注射用受精卵采自C57BL/ 6J（♀）与CBA（♂）的Fl代；胚胎移植（受精卵输卵筐移植）受体采用ICR代假孕母鼠；受精卵供体、受体及新生仔鼠均维持在SPF级小鼠饲养环境；阳性小鼠需通过测序证实待敲基因的序列。

条件性基因敲除或敲入小鼠模型制备

根据客户的需求进行打靶载体构建，由客户提供目标基因的Ensembl序列号，并提出拟剔除（或敲入） 区域；研究院科研人员根据客户的需求确定flox或敲入片段插入的区域，经认可后研究院科研人员设计打靶策略，并反馈客户，经害户确认后进行打靶载体的构建及后续研发。研究院承诺提供3只以上阳性小鼠。

技术指标：显微注射用受精卵采自C57BL/6J（♀）与CBA（♂）的Fl代 ；胚胎移植（受精卵输卵雷移植）受体采用ICR代假孕母鼠；受精卵供体、受体及新生仔鼠均维持在SPF级小鼠饲养环境。对于基因敲入、flox小鼠各阶段均需通过测序证实敲入基因的存在和序列正确。

原核/胞质注射

原核

原核/胞质注射可以用于对mRNA、普通小片段及大片段DNA、BAC(Bacterial Artificial Chromosome，细菌人工染色体）进行注射、以及相关DNA混合共注射。

囊胚注射

囊胚注射是用于对已打靶好的ES细胞进行囊胚注射，目的是为了得到嵌合率较高的小鼠，而且要求被注射进入的ES细胞能发育成生殖细胞。

由客户提供待注射物品，研究院负责小鼠胚胎的显微注射、胚胎移植、移植小鼠孕期观察饲养、嵌合体小鼠出生记录、生命维持等。

技术指标：显微注射用胚胎取自C57BL/6J或ICR（由客户选择）；胚胎移植（受精卵子宫内移植）受体采用ICR代假孕母鼠；胚胎供体受体及新生仔鼠均维持在SPF级小鼠饲养环境。

净化

外来的小鼠进入本中心前需进行隔离检疫，报告显示有污染的动物进入SPF级设施需要通过生物净化，以防止未知的微生物、病原体及小鼠传染病所带来的风险。

供鼠要求：

1.健康雄鼠1-2只，3-6 月龄（超龄可以尝试），品系背景明确。我们可提供提供野生型小鼠净化。
2.健康雄鼠1-2只，3-6 月龄（超龄可以尝试），同品系雌鼠4-8周龄，5只以上。

扩繁

优点：

1.体外受精技术相当于雄鼠和大量的雌鼠在体外同时交配，这保证了出生小鼠周龄的一致性，降低了由于小鼠周龄差异导致的实验误差，实验数据更可靠。

优点：

1.由于移植的ICR受体都是SPF级别，所以出生的小仔相当于做了一次净化，新生小鼠的身体素质超赞。

保种

模型小鼠胚胎冻存保种

由客户提供转基因或基因敲除雄鼠，研究院负责将该小鼠与超排的C57BL/6J交配，取桑惺胚阶段的胚胎，并采用玻璃化冷冻的方法进行胚胎冻存，保存在液氮中。

客户提供5-10只6-8周龄雄鼠（转基因阳性鼠或基因敲除杂台子／纯台子雄鼠），并提供基因修饰鼠基因型鉴定的引物及条件；研究院负责小鼠基因型复检（PCR方法），将超排后的4-6周龄C57BL/6J雌鼠与基因修饰雄鼠交配，取桑惺胚阶段的胚胎，每个国系冻存200枚桑惺胚阶段的胚胎。

小鼠胚胎操作及品系建立

本研究院还可进行小鼠卵子、精子和胚胎的采集、冻存和复苏；并可进行体外受精、显微受精、克隆、胚胎生物净化、小鼠嵌合胚胎的制备和四倍体胚胎拯救等技术服务。收费标准视具体情况而定。

冻存小鼠胚胎复苏繁殖

冷冻保存的胚胎由害户运至研究院（液氮中运输），研究院按照客户提供的冻存及复苏方法，复苏胚胎，并将胚胎移植到假孕母鼠体内（输卵雷移植或子宫移植），仔鼠出生记录及基因型鉴定等。

技术指标：胚胎复苏并将胚胎移植到假孕母鼠ICR的子富（每侧移植6枚囊胚）内，受体鼠及新生鼠均维持在SPF级小鼠饲养环境中。研究院保存的胚胎复苏后，提供5只以上SPF级转基因阳性鼠或基因剔除杂合子小鼠，雌雄不限；客户提供的冷冻胚胎复苏移植后，所高出生的仔鼠均提供给客户。

模式动物定制流程

常用转基因及基因剔除小鼠目录