大/小鼠OVA建立过敏性哮喘模型

问：如何选择合适的小鼠品系及致敏方案以确保稳定的Th2型炎症反应？

答：BALB/c小鼠是构建过敏性哮喘模型的首选品系。这是因为其免疫系统更倾向于产生强烈的Th2型免疫应答，表现为OVA特异性IgE抗体水平、支气管肺泡灌洗液中嗜酸性粒细胞浸润以及IL-4、IL-5、IL-13等Th2细胞因子的升高通常更为显著。虽然C57BL/6等品系也可用于造模，但其Th2反应强度通常弱于BALB/c小鼠。在选择性别时，有研究指出雌性小鼠可能表现出更明显的变应性气道炎症。

标准的致敏方案通常在第0、7、14天进行腹腔注射。致敏液由OVA抗原与氢氧化铝佐剂混合而成，佐剂的作用是强烈激活免疫系统，如同“警报增强器”。为确保混合充分，建议使用氢氧化铝凝胶而非干粉，因为凝胶与OVA抗原形成的乳液更稳定，能有效增强致敏效果，避免注射时堵塞针头。一个常见的致敏液配方是每只小鼠注射含100-200μg OVA和1-4mg氢氧化铝佐剂的混合液。

问：气道激发阶段有哪些技术关键点？如何评估模型的成功建立？

答：通常在末次致敏后一周（如第21天）开始进行气道激发，连续5-7天，每天给予小鼠吸入1%-2%的OVA溶液雾化激发，每次时长约30分钟。雾化装置的选择至关重要，专业的雾化装置（如压缩雾化器）能产生直径约1-5微米的气溶胶颗粒，确保颗粒能有效沉积于小鼠的小气道，诱导出理想的气道炎症。超声雾化产生的颗粒可能较大，主要沉积于上呼吸道，影响激发效果。雾化时，需控制雾化箱内的小鼠密度，以保证每只动物能充分暴露于气溶胶中，同时避免缺氧。

一个成功的哮喘模型需要从行为学、病理学、免疫学和功能学等多个层面进行综合判断。

问：在模型构建中常见的挑战有哪些？有何优化策略？

答：细胞因子浓度过低：有时尽管病理炎症明显，但BALF中检测到的IL-4、IL-5等细胞因子浓度却很低（如仅5-18 pg/mL）。这可能并非模型失败，而是与技术细节有关。优化措施包括：尝试使用不同品牌（如R&D Systems）的ELISA试剂盒；适当减少支气管肺泡灌洗液的灌洗体积以浓缩样品；或增加检测指标，如IL-13也是反映Th2反应的重要细胞因子。

模型不稳定或炎症强度不足：若希望获得更剧烈或更慢性的哮喘表型，可考虑优化激发方案。例如，适当增加雾化激发的次数（如延长至7天以上）​ 可能比增加致敏次数更有效。对于旨在研究气道重塑的慢性哮喘模型，则需要显著延长激发时间（数周甚至数月）。